Cuando el esfínter de Oddi se contrae tónicamente entre comidas, la bilis no puede fluir hacia el duodeno y, en su lugar, pasa a la vesícula biliar para almacenarse. La presión del esfínter suele ser de 15 mmHg en reposo, pero se eleva a más de 100 mmHg varias veces por minuto de forma cíclica; en ausencia de estimulación para la relajación, esto supera la presión media en reposo de 10 mmHg en la vesícula biliar.
Mientras está almacenada, la composición de la bilis se modifica aún más. Los iones de sodio descienden por un gradiente de difusión hacia el exterior de la vesícula biliar, acompañados de agua y cloruro o bicarbonato. La bilis que queda es de menor volumen pero de mayor concentración.
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