El diagnóstico se realiza mediante la prueba de fijación del complemento, la prueba de aglutinación de Schuffer, los anticuerpos contra Leptospira y los cultivos de sangre, orina y LCR.
La leptospira puede cultivarse en la primera semana de infección, pero durante la segunda semana el hemocultivo es negativo. Las pruebas serológicas se vuelven positivas en la segunda semana.
Los cultivos de orina pueden ser positivos después de unas dos semanas. Leptospira sobrevive mejor en orina alcalina.
En la leptospirosis suele haber leucocitosis polimorfonuclear.
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