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Lorsque le sphincter d'Oddi est contracté de manière tonique entre les repas, la bile ne peut pas s'écouler dans le duodénum et passe dans la vésicule biliaire pour y être stockée. La pression du sphincter est généralement de 15 mmHg au repos, mais elle s'élève à plus de 100 mmHg plusieurs fois par minute de manière cyclique ; en l'absence de stimulation de la relaxation, cette pression dépasse la pression moyenne au repos de 10 mmHg dans la vésicule biliaire.
Pendant le stockage, la composition de la bile est encore modifiée. Les ions sodium descendent un gradient de diffusion vers l'extérieur de la vésicule biliaire, accompagnés d'eau et de chlorure ou de bicarbonate. La bile laissée sur place est d'un volume plus petit mais d'une concentration plus élevée.
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