Isolement de l'ADN

Un problème fréquemment rencontré dans le domaine du génie génétique est celui de la meilleure façon d'isoler des séquences d'ADN à partir de mélanges complexes. Il existe plusieurs approches :

• créer une bibliothèque d'ADN. Il s'agit d'utiliser une enzyme endonucléase de restriction pour diviser l'ADN génomique en de nombreux fragments qui sont ensuite introduits dans des vecteurs. Les vecteurs sont ensuite amplifiés indépendamment les uns des autres.
  
  
• créer une bibliothèque d'ADN complémentaire. L'ARN messager d'un tissu d'intérêt est converti en ADNc par une enzyme transcriptase inverse. L'ADNc est transformé en ADN par une enzyme polymérase avant le clonage final. En général, l'ADNc sera différent de l'ADN dont il provient à l'origine, car il a été produit indirectement à partir d'un ARNm dépourvu d'introns - il a fait l'objet d'une modification post-traductionnelle.
  
  
• synthétiser une sonde oligonucléotidique. Il faut pour cela connaître la séquence d'acides aminés de tout ou partie de la protéine étudiée. La sonde est fabriquée à partir des paires de bases qui seraient nécessaires comme modèle pour la protéine supposée. La sonde marquée par radioactivité est capable de se lier à sa séquence complémentaire parmi une bibliothèque d'alternatives.