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La ponction lombaire confirme le diagnostic d'HSA mais doit être réservée aux patients chez qui le scanner ne détecte pas de sang. La PL est contre-indiquée si le patient présente un niveau de conscience altéré ou des signes neurologiques focaux. En général, la PL doit être différée jusqu'à au moins 12 heures après l'apparition des céphalées, à l'exception des rares patients dont les antécédents sont si incomplets qu'une méningite ne peut être exclue.
Le LCR doit être centrifugé et le surnageant examiné à la recherche d'une xanthochromie - liquide de couleur paille, due aux produits de dégradation de l'hémoglobine - détectable entre 12 heures et 2 semaines après l'événement. Le LCR ne peut être déclaré normal qu'après une analyse spectophotométrique de la xanthochromie.
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