Een probleem dat vaak voorkomt bij genetische manipulatie is hoe je het beste DNA-sequenties kunt isoleren uit complexe mengsels. Er zijn verschillende benaderingen:
- creëer een DNA-bibliotheek. Hierbij wordt een restrictie-endonuclease-enzym gebruikt om genomisch DNA op te delen in een heleboel fragmenten die vervolgens allemaal in vectoren worden ingebracht. De vectoren worden dan onafhankelijk van elkaar geamplificeerd.
- een aanvullende DNA-bibliotheek maken. Boodschapper-RNA van een interessant weefsel wordt door een enzym reverse transcriptase omgezet in cDNA. Het cDNA wordt door een polymerase-enzym in DNA veranderd voordat het uiteindelijk wordt gekloneerd. Over het algemeen verschilt cDNA van het DNA waar het oorspronkelijk vandaan komt, omdat het indirect is geproduceerd uit mRNA zonder intronen - het is post-translationeel gemodificeerd.
- een oligonucleotide sonde synthetiseren. Hiervoor is kennis nodig van de aminozuurvolgorde van het eiwitproduct dat onderzocht wordt, of een deel daarvan. De sonde wordt gemaakt van basenparen die nodig zouden zijn als sjabloon voor het gepostuleerde eiwit. De radioactief gelabelde probe is in staat om te binden aan zijn complementaire sequentie uit een bibliotheek van alternatieven.
Gerelateerde pagina's
Maak een account aan om paginanotities toe te voegen
Voeg informatie toe aan deze pagina die handig is om bij de hand te hebben tijdens een consult, zoals een webadres of telefoonnummer. Deze informatie wordt altijd weergegeven wanneer je deze pagina bezoekt