O diagnóstico é feito através do isolamento do Clostridium botulinum das fezes do doente, ou de alimentos suspeitos, ou através da deteção da toxina no soro ou nas fezes do doente.
A estimulação nervosa repetitiva mostra um decréscimo no potencial de ação muscular evocado a taxas lentas de estimulação, mas um aumento da amplitude durante a estimulação a frequências mais rápidas - um defeito pré-sináptico típico.
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