Existe invariavelmente uma hiperbilirrubinemia conjugada com transaminases elevadas.
A investigação de primeira linha é a ecografia hepática, durante a qual é importante visualizar a vesícula biliar; se esta puder ser vista como normal, a atresia biliar é improvável.
O exame com radioisótopos pode não conseguir visualizar a árvore biliar e o isótopo pode não chegar ao intestino.
A biópsia hepática mostra proliferação dos ductos biliares, tampões biliares e edema e fibrose portal ou perilobular, com a arquitetura lobular hepática básica intacta. Esta operação só deve ser realizada num centro com instalações para lidar com as potenciais complicações da biopsia hepática.
A atresia biliar pode ser excluída se for encontrado líquido com coloração de bílis na intubação duodenal.
Pode ser necessária uma laparotomia para confirmar o diagnóstico.
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