A velocidade de uma reação catalisada por uma enzima aumenta até uma velocidade máxima, Vmax, com o aumento da concentração de substrato. Vmax representa a saturação da enzima com o substrato. Km, a constante de Michaelis, representa a concentração de substrato que produz metade de Vmax. É uma medida da afinidade da enzima pelo seu substrato: quanto menor for Km, maior é a afinidade.
Na prática, isto significa
- devem ser utilizadas concentrações elevadas de substrato quando se testa a atividade in vitro de uma enzima
- os valores de Vmax e Km podem ser determinados in vitro e in vivo para comparar a contribuição de uma determinada enzima para uma reação metabólica específica
- um gráfico do recíproco da concentração de substrato (eixo x) contra o recíproco da velocidade de reação (eixo y) pode dar Vmax - o recíproco da interceção do eixo y - e Km - o recíproco negativo da interceção do eixo x. Este gráfico é designado por gráfico de Lineweaver-Burk.
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