A punção lombar confirma o diagnóstico de HSA, mas deve ser reservada para os doentes em que não é possível detetar sangue por TC. A punção lombar é contra-indicada se o doente apresentar um nível de consciência diminuído ou sinais neurológicos focais. Normalmente, a punção lombar deve ser adiada até pelo menos 12 horas após o início da cefaleia, à exceção dos raros doentes com uma história tão incompleta que não se pode excluir a possibilidade de meningite.
O LCR deve ser centrifugado e o sobrenadante examinado para detetar xantocromia - líquido cor de palha, devido aos produtos de degradação da hemoglobina - detetável entre 12 horas e 2 semanas após o evento. O LCR só pode ser declarado normal após análise espectofotométrica da xantocromia.
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