Comme la majorité des réactions non équilibrées de la glycolyse sont insaturées, le débit de la voie dépend de l'apport de précurseurs par, par exemple :
- la glycogénolyse dans le foie
- l'absorption de glucose, de fructose et de galactose à partir de l'intestin.
En tandem, un certain nombre d'enzymes de la voie sont régulées par des agents extrinsèques et intrinsèques à la cellule :
- hexokinase
- 6-phosphofructokinase
- pyruvate kinase
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