Um aumento da temperatura aumenta a energia cinética das moléculas envolvidas numa reação catalisada por uma enzima. A velocidade da reação aumenta. Normalmente, por cada aumento de 10 graus C na temperatura, a velocidade da reação aumenta 1,5-2,5 vezes. No entanto, quando a temperatura sobe acima dos 40 graus C, as ligações dentro da enzima começam a romper-se. A exposição prolongada a temperaturas elevadas resulta em desnaturação enzimática e perda de atividade.
As enzimas dos mamíferos funcionam otimamente a cerca de 37 graus C.
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